熒光探針定義
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熒光探針定義
術語“探針”通常用于描述熒光寡核苷酸。常用的 DNA 探針是雙標記的,因此由三個不同的部分組成:
※ 負責特定 DNA 識別的 5 到 35 bp 之間的單鏈 DNA
※ 在特定波長發射熒光的報告染料
※ 一種猝滅劑,在一定狀態下吸收報告染料發出的光。
過程都是物理學
DNA 探針用適當的報告染料和猝滅劑配對進行標記,以利用 Frster 共振能量轉移(簡稱 FRET)。
讓我們仔細看看熒光的另一面:
熒光被定義為“響應光照射而自發發射的光”。換言之,電子在光激發后進入更高能量的狀態。然而,這種狀態是高度不穩定的。
一旦被激發的電子返回到較低的能量狀態,多余的能量就會以光子的形式發射出來。
熒光團有彩虹的所有顏色,取決于它們發出的能量。
對于短 DNA 探針,報告染料和猝滅劑的分離發生在聚合酶水解探針并釋放報告染料之后。
需要水解的探針稱為 TaqMan 探針,基于具有 3'-5' 核酸外切酶活性的 TaqMan 聚合酶。
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